Nefħa sħiħa tar-reżina
Iżen 2.0 g reżina Wang vojta f'tubu ta 'reazzjoni nadif u niexef, żid 15 mL DMF, Attivazzjoni tat-temperatura tal-kamra 30 min madwar.
Ħu l-ewwel aċidu amminiku
F'temperatura tal-kamra, iffiltra s-solvent mill-pass preċedenti permezz ta 'qalba tar-ramel u żid 1 mmol 5 molar eċċess C L-ewwel aċidu amminiku fl-aħħar, 5 darbiet DMAP żejjed molar, 5 molar eċċess DIC, DMF Do solvent temperatura tal-kamra reazzjoni 3 h. Uża wara li titlesta r-reazzjoni DMF Aħsel 4 ~ 6 darbiet, 5-6 darbiet kull darba mL. Imbagħad żid ammont xieraq ta 'piridina u anidride aċetiku bi proporzjon tal-volum ta' 1:1, u jirreaġixxi għal 30 min. Uża wara li titlesta r-reazzjoni DMF Aħsel 4 ~ 6 darbiet, 5-6 darbiet kull darba mL. (effett: Imblokka l-mikrodots attivi fuq ir-reżina vojta mhux reattiva.)
Fmoc Tluq ta' gruppi protettivi
Neħħi s-solvent mill-pass preċedenti permezz ta 'filtrazzjoni ta' ġbid, u żid 10 mL 20% ta 'piperidine DMF Is-soluzzjoni hija miżjuda mar-reżina, N2 Ħawwad 10 min Finalment, iffiltra s-soluzzjoni u żid 10 mL 20% ta' soluzzjoni ta 'piperidine DMF, N2 Blow u ħawwad 5 min Imbagħad iffiltra s-soluzzjoni u rrepeti din l-operazzjoni darbtejn. DMF Aħsel 4 darbiet, aħsel 2 darbiet bil-metanol, 5-6 darbiet kull darba mL.
Ittestjar tal-effett tat-tneħħija tan-ninhydrin
Oħroġ ammont żgħir ta 'reżina, aħsilha tliet darbiet bil-metanol, żid ninhydrin, KCN, Qatra waħda kull waħda ta' soluzzjoni ta 'fenol, 105 grad -110 grad Tisħin 5 min, Tidwir blu skur huwa reazzjoni pożittiva, li tindika li t-tneħħija hija kompluta u l-pass li jmiss tar-reazzjoni jista' jitwettaq .; Jekk huwa bla kulur, dan ifisser li l-grupp ta 'protezzjoni ma jkunx tneħħa kompletament, u l-operazzjoni ta' deprotezzjoni ta 'hawn fuq trid tiġi ripetuta.
Imbagħad it-tieni aċidu amminiku u t-tneħħija tal-grupp tal-Protezzjoni Fmoc
Iżen 3 darbiet żejjed molar C It-tieni aċidu amminiku fl-aħħar, 3 darbiet żejjed molari HBTU u 3 darbiet żejjed molari ta 'HOBT Fit-tubu ta' reazzjoni, żid ammont xieraq DMF Wara li s-soluzzjoni tinħall kompletament, żid 10 darbiet żejjed molari (pura) DIEA, Reazzjoni f'temperatura tal-kamra 40 min, uża DMF Aħsel 4-6 darbiet kull darba, m5-6 darbiet. Ħu ammont żgħir ta 'użu tar-reżina Test b'reaġent ta' skoperta ninhydrin u se jidher bla kulur, imbagħad żid 10 mL 20% ta 'piperidine DMF Soluzzjoni tneħħija Fmoc, Agħmel dan darbtejn għal 10 min, 5min, wara l-użu DMF Aħsel 4 darbiet, aħsel 2 darbiet b'mL, 5-6 darbiet kull darba mL. Oħroġ ammont żgħir ta 'użu tar-reżina Uża r-reaġent ta' skoperta ninhydrin biex tiskopriha. Jekk l-iskoperta hija blu, tista 'tipproċedi għall-pass li jmiss tar-reazzjoni.
B'analoġija, irrepeti l-passi 2.6 sakemm is-sinteżi tkun N Neħħi l-aħħar aċidu amminiku fl-aħħar Fmoc Protect bażi, imbagħad ixxotta.
Tfaqqigħ tar-reżina u separazzjoni u skoperta tal-prodott pur
Fl-aħħarnett, uża soluzzjoni tat-tqattigħ ta 'aċidu trifluworoacetic (95% TFA:2% TIS:2% EDT:1% H2O) Aqta' 2 h, Iffiltra s-soluzzjoni ta 'reazzjoni bil-ġbid u tikseb soluzzjoni ta' aċidu trifluworoacetic tal-polypeptide. Nixxef il-lisat bin-nitroġenu kemm jista 'jkun, ippreċipita bl-etere, iċċentrifuga, u mbagħad aħsel bl-etere għal 3 sekondi. ~5times, inkiseb solidu abjad. Wara li tħollha f'ilma pur, HPLC Neħħi l-melħ u purifika, iffriża-nixxef u tippreċipita kristalli, ħu ammont żgħir MS analizza.