Reaġenti għall-kondensazzjoni tal-peptidi

Fil-preżent, fis-sintesi ta 'peptidi, metodi ta' attivazzjoni karbossiliċi jintużaw prinċipalment biex jitlestew reazzjonijiet peptidi. L-aktar metodi bikrija użati kienu li jiġu attivati ​​l-aċidi amminiċi fi kloruri tal-aċidu, ażidi, anidridi simmetriċi u anidridi tal-aċidu mħallta. Madankollu, minħabba l-eżistenza ta 'raċemizzazzjoni ta' aċidu amminiku taħt dawn il-kundizzjonijiet, il-periklu ta 'reaġenti ta' reazzjoni u l-kumplessità tal-preparazzjoni, ġew sostitwiti gradwalment minn reaġenti ta 'kondensazzjoni aktar tard, li jistgħu jinqasmu f'żewġ tipi skond l-istrutturi tagħhom.: Ir-reaġenti ta' kondensazzjoni ewlenin huma: Tip ta 'Carbodiimide, tip ta' melħ onju (Uronju).

Prinċipalment jinkludu: DCC, DIC, EDC.HCl stenna. uża DCC twettaq ir-reazzjoni, minħabba d-DCU, jeżistu DMF Għandu solubilità ftit li xejn u jipproduċi preċipitat abjad, għalhekk ġeneralment ma jintużax fis-sinteżi tal-fażi solida-. Madankollu, minħabba li huwa rħis, jista 'jitneħħa permezz ta' filtrazzjoni f'sintesi tal-fażi likwida-, u għadu użat ħafna. EDC.HCl Minħabba s-solubilità fl-ilma tiegħu, ħafna drabi jintuża fil-konnessjoni ta 'polipeptidi u proteini, u huwa wkoll pjuttost suċċess. Madankollu, wieħed mill-akbar żvantaġġi ta 'dan it-tip ta' reaġent ta 'kondensazzjoni huwa li jekk jintuża waħdu, se jkun hemm aktar reazzjonijiet sekondarji. Madankollu, ir-riċerka turi li jekk miżjuda matul il-proċess ta 'attivazzjoni HOBt, HOAt Tali reaġenti jistgħu jikkontrollaw reazzjonijiet sekondarji għal medda baxxa ħafna. Il-mekkaniżmu ta 'reazzjoni huwa kif ġej:

Figura 2 DIC Mekkaniżmu ta 'reazzjoni ta' Attivazzjoni

Ir-reaġenti tal-kondensazzjoni tat-tip tal-melħ tal-Onium għandhom reattività għolja u veloċità mgħaġġla, u issa huma użati ħafna, prinċipalment inklużi: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP stenna. Waqt l-użu ta 'dan ir-reaġent, jeħtieġ li tiżdied bażi organika, bħal diisopropylethylamine (DIEA), N- Methylmorpholine (NMM), L-aċidu amminiku jista' jiġi attivat biss wara li jiġi miżjud dan ir-reaġent. Il-mekkaniżmu ta 'reazzjoni huwa kif ġej:

Ir-reżini użati fis-sinteżi tal-peptidi tal-fażi solida-ġeneralment huma materjali tal-polistirene-divinylbenzene, b'qisien li jvarjaw minn 75 sa 150 μm, Il-grad ta' cross-linking huwa bejn 1-2%, u l-biċċa l-kbira ta' dawk użati issa huma 1%, minħabba li f'dan il-grad DCMin crossing {8} Għandu proprjetajiet ta 'nefħa tajba u għandu struttura ta' netwerk tri-dimensjonali, u l-molekuli reattiv jistgħu jiċċaqilqu liberament ġewwa r-reżina. L-aktar parti kritika tar-reżina hija d-driegħ li jgħaqqad, li huwa konness mar-reżina f'tarf wieħed u jservi bħala sit ta 'reazzjoni fit-tarf l-ieħor. Ir-reżini li jintużaw ħafna bħalissa huma: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA wait. f'PAM, MBHA jintuża fl-istrateġija BOC, minħabba li huwa stabbli ħafna għall-aċidu, jeħtieġ li jkun HF, TFMSA Jista 'jinqata' biss taħt kundizzjonijiet ta 'aċidu qawwi.

Wara li titlesta s-sinteżi tal-peptidi tal-fażi solida-, għandu jintgħażel reaġent ta' qsim xieraq biex jinqasam il-peptide mir-reżina, u mbagħad jippreċipita b'etere glaċjali, iġbor il-preċipitat permezz ta' ċentrifugazzjoni, u HPLC Issepara, purifika, u nixxef- biex tikseb il-prodott finali tal-peptidi.

Minħabba r-reżini differenti u s-sekwenzi ta 'aċidu amminiku magħżula, il-metodi ta' qsim magħżula waqt il-qsim mhumiex eżattament l-istess. Ġeneralment, il-kundizzjonijiet tal-qsim huma magħżula taħt kundizzjonijiet aċidużi. Għal PAM, MBHA Resin, ġeneralment użat HF ​​Cutting, p-cresol, p-mercaptophenol, anisole u reaġenti oħra jeħtieġ li jiżdiedu matul il-proċess tat-tqattigħ. U għal Wang, Rink-Amide, Trt Resin, ġeneralment użat TFA Cutting, żid ethylene glycol, anisole sulfide, ilma, triisopropylsilane, phenol, eċċ matul il-proċess tat-tqattigħ.

Dawn ir-reaġenti addittivi jintużaw prinċipalment bħala reaġenti tal-qbid tal-karbocation. L-iskop huwa li jinqabad il-karbocation iġġenerat waqt ir-reazzjoni tal-qsim u jitnaqqsu r-reazzjonijiet sekondarji kkawżati mill-attakk ta 'dawn il-jonji tal-karbocation fuq xi ktajjen tal-ġenb tal-aċidu amminiku. L-aċidi amminiċi li huma aktar probabbli li jipproduċu reazzjonijiet sekondarji jinkludu: Trp, Tyr. Id-dożaġġ tar-reaġent tat-tqattigħ huwa ġeneralment 10-15 ml/g raża.

Proporzjonijiet ta 'qtugħ użati komunement: HF/p-cresol/p-thiocresol(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2.5/2.5), Ir-reazzjoni normalment titwettaq f'temperatura tal-kamra 2 h-4h.

Fis-sinteżi tal-peptidi tal-fażi solida-, ħafna drabi niltaqgħu mal-problema ta 'falliment tas-sintesi tal-peptidi jew effiċjenza baxxa ta' sinteżi. Ir-raġuni ewlenija hija dovuta għas-sekwenza tal-peptidi, minħabba li xi sekwenzi tal-peptidi huma ffurmati fuq ir-reżina. -It-tiwi jibdel il-proprjetajiet ta 'nefħa tar-reżina, u jista' wkoll jindifnu s-siti attivi tar-reazzjoni fir-reżina, li jagħmilha diffiċli biex ir-reazzjoni tipproċedi. Rapporti kurrenti jindikaw li

Uża solventi mħallta, DMSO/DMF, 6N Guanidine/DMF soluzzjoni

Żid it-temperatura tar-reazzjoni jew uża l-metodu microwave

Uża melħ kaotropiku, LiCl, NaClO4 stenna.

Uża dawk bi proprjetajiet ta' nefħa aħjar PEG-reżina PS, filwaqt li tnaqqas it-tagħbija tar-reżina (0.05-0.2 mmol/g)

​